一种用于预防宠物腹泻的凝结芽孢杆菌King27及菌剂、制备方法和应用与流程

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本发明涉及微生物应用，具体涉及一种用于预防宠物腹泻的凝结芽孢杆菌king27及菌剂、制备方法和应用。

背景技术：

1、犬和猫是现在最常见的家庭宠物，但其消化系统非常脆弱和敏感，许多细小因素都会引起肠道内环境的紊乱，导致宠物出现腹泻、呕吐等症状。日常生活中，引起宠物腹泻的常见原因包括以下几种：1、宠物断奶后换宠物奶粉，乳糖不耐受导致腹泻；2、环境温度改变导致的肠胃受凉，出现季节性腹泻；3、饮食或环境导致细菌侵入肠胃系统，细菌感染导致腹泻。

2、目前治疗宠物腹泻以口服抗生素药物为主，主要治疗细菌感染引起的腹泻，但是抗生素容易造成宠物肠道菌群失调，抗生素在宠物肠道内会造成宠物肠道的菌群失调使病后的宠物很难完全康复。抗菌药物的使用同样存在生态安全、药物残留、耐药性、抗生素相关性腹泻等弊端，近年来，世界各国都在推进饲料“禁抗”模式，因此寻求安全有效的抗生素替代品迫在眉睫。

3、中国专利cn114437993a公开了一种罗伊氏乳杆菌及其在制备预防猫腹泻制剂中的应用，对于沙门氏菌、空肠弯曲杆菌和志贺氏菌等常见致猫腹泻的致病菌有抑菌效果。中国专利cn113057253b涉及一种调理肠胃的复合益生菌宠物食品，通过自制益生菌添加剂，并配合特定的中药提取物和儿茶素，相互之间协同发生作用，从而可以对宠物肠道中的有益微生物实现增殖，而对肠道中有害菌起到抑制效果，最终改善宠物肠道中微生物种群结构和数量，有效调节了宠物肠胃。市面上已有或者已报道的用于预防、治疗宠物肠道疾病的益生菌制剂或复合益生菌制剂，主要针对有害菌侵染引起的宠物腹泻，功能较为单一，对于宠物日常生活中出现的冷凉泻、乳糖不耐受性腹泻有预防效果的益生菌产品未见报道。

技术实现思路

1、针对现有用于预防或治疗宠物腹泻的益生菌制剂功能单一、防治效果达不到预期的问题，本发明提供一种用于预防宠物腹泻的凝结芽孢杆菌king27及其代谢制剂、应用，该菌种不仅可以较强地抑制肠道病原菌，还能够预防宠物季节性腹泻和宠物断奶后换宠物奶粉导致的乳糖不耐受腹泻。

2、第一方面，本发明提供一种用于预防宠物腹泻的凝结芽孢杆菌king27，凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)king27于2022年8月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.25556，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

3、凝结芽孢杆菌是兼性厌氧菌，在有氧及无氧的环境下都可生长，能适应低氧的肠道环境，对酸和胆汁有较高的耐受性，能够进行乳酸发酵，产生的l-乳酸能降低肠道ph值，抑制有害菌，并能促进双歧杆菌等有益菌的生长和繁殖。凝结芽孢杆菌能够形成芽孢，与其他不产乳酸的芽孢杆菌相比，有利于恢复胃肠道的微生态平衡。凝结芽孢杆菌芽孢发酵后产生大量抗菌凝固素，能有效抑制需氧致病菌生长。

4、第二方面，本发明提供一种用于预防宠物腹泻的凝结芽孢杆菌king27菌剂，包括上述凝结芽孢杆菌king27的菌体浓缩液。

5、第三方面，本发明提供上述凝结芽孢杆菌king27菌剂的制备方法，具体包括以下步骤：

6、(1)取冷冻保存的凝结芽孢杆菌king27菌株进行活化，将活化后的单一菌落接种于mrs液体培养基中，40～45℃、200r/min培养18～24h，获得种子液；

7、(2)将种子液接种进入一级发酵培养基，通气、40～45℃、200r/min摇床培养22～26h后，得到一级发酵液；将一级发酵液移种进入二级发酵培养基，通气、40～45℃、200r/min摇床培养45～50h后，得到二级发酵液；

8、(3)将二级发酵液离心后，收集菌体，使用无菌生理盐水洗涤后，重悬于15％(w/w)的复原脱脂乳中，获得悬浊液；将菌悬液冷冻干燥后，获得菌粉；

9、(4)将菌粉与葡萄糖混合，制成菌剂。

10、进一步的，步骤(1)中活化的具体操作为：取冷冻保存的凝结芽孢杆菌king27菌株，在mrs平板培养基上进行划线培养，42℃、有氧培养48h。

11、进一步的，步骤(2)中，种子液接种进入一级发酵培养基的接种量为4％～6％。

12、进一步的，步骤(2)中，一级发酵培养基和二级发酵培养基的制备方法如下：

13、葡萄糖40g/l、酵母膏10g/l、蛋白胨15g/l、磷酸氢二钾3g/l、硫酸锰0.05g/l、氯化铵4g/l、碳酸钙18g/l，培养基于121℃灭菌20min，冷却至40～45℃备用。

14、第四方面，本发明提供上述凝结芽孢杆菌king27在制备预防宠物肠道病原菌引起的腹泻的产品上的应用。

15、第五方面，本发明提供上述凝结芽孢杆菌king27在制备预防宠物受凉导致的季节性腹泻的产品上的应用。

16、第六方面，本发明提供上述凝结芽孢杆菌king27在制备预防宠物乳糖不耐受引起的腹泻产品上的应用。

17、本发明的有益效果在于：

18、本发明提供的凝结芽孢杆菌king27，能够有效抑制引起宠物腹泻的常见病原菌。同时经试验验证，将凝结芽孢杆菌king27制成的菌剂添加至宠物的饲喂饲料，可以有效预防宠物受凉导致的季节性腹泻和乳糖不耐受引起的腹泻，大大降低宠物腹泻率，对于日常维持宠物健康、预防宠物腹泻具有重要意义。

技术特征：

1.一种用于预防宠物腹泻的凝结芽孢杆菌king27，其特征在于，凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)king27于2022年8月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.25556，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.一种用于预防宠物腹泻的凝结芽孢杆菌king27菌剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的凝结芽孢杆菌king27的菌体浓缩液。

3.一种如权利要求2所述凝结芽孢杆菌king27菌剂的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中活化的具体操作为：取冷冻保存的凝结芽孢杆菌king27菌株，在mrs平板培养基上进行划线培养，42℃、有氧培养48h。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，种子液接种进入一级发酵培养基的接种量为4％～6％。

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，一级发酵培养基和二级发酵培养基的制备方法如下：

7.一种如权利要求1所述凝结芽孢杆菌king27在制备预防宠物肠道病原菌引起的腹泻的产品上的应用。

8.一种如权利要求1所述凝结芽孢杆菌king27在制备预防宠物受凉导致的季节性腹泻的产品上的应用。

9.一种如权利要求1所述凝结芽孢杆菌king27在制备预防宠物乳糖不耐受引起的腹泻的产品上的应用。

技术总结
本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种用于预防宠物腹泻的凝结芽孢杆菌King27及菌剂、制备方法和应用。凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)King27于2022年8月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.25556，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株能够有效抑制引起宠物腹泻的常见病原菌。同时经试验验证，将凝结芽孢杆菌King27制成的菌剂添加至宠物的饲喂饲料，可以有效预防宠物受凉导致的季节性腹泻和乳糖不耐受引起的腹泻，大大降低宠物腹泻率，对于日常维持宠物健康、预防宠物腹泻具有重要意义。

技术研发人员：周文浩,王丽媛,孙川,蒋能凯,郄璐,张永娟,房钰,王雪娇
受保护的技术使用者：山东威曼宠物食品有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13

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