肠道菌群总DNA提取方法

现代预防医学2012年第39卷第2期ModernPreventiveMedicine202Vol.39NO.2

文章编号003-857222-45-4中图分类号R378.2文献标志码A【实验技术及其应用】肠道菌群总提取方法的研究王广平1徐宗凯2仇秀琴2摘要目的通过实验得出提取DNA的最佳方法并对样品处理等实验条件进行优化为PCR检测中模板DNA的制备提供实验依据。方法一.样品处理二.DNA提取1.醋酸钠-乙醇沉淀法2.水煮法3.水煮法-试剂盒法4.试剂盒法5.CTAB法三.DNA的检测。结果实验效果最佳的DNA提取方法是试剂盒法所得到的结果包括DNA纯度和浓度是几种提取方法中最好的水煮法-试剂盒法结果较试剂盒法相近但操作较烦琐醋酸钠-乙醇沉淀法、CTAB法和水煮法得到的DNA中含有较多的蛋白质、RNA等杂质结论试剂盒法是提取DNA最佳方法关键词肠道菌群DNA提取方法STUDYONTHEDAEXTRACTIOMETHODOFTHEITESTIALFLORAWANGGuang-pingXUZong-kaiCHOUXiu-qin.haotianDistrictenterforiseasePreventionandontrolGuangyuan628000hinaAbstractObjectiveTogetthebestmethodofDNAextractionandoptimizetheconditionofexprimentationjustlikethedispoalofsampleandsoonbyexperimentandprovideexperimentalreferenceforPCR.Methods.Samplesdispose2.DNAextraction.Sodiumacetate-ethanolprecipitation2.Boiled3.BoiledAct-kit4.Kitand5.CTAB.ResultsThebestmethodforDNAextractionwaskit.TheresultofBoiledAct-kitwasclosetokitbuttherewerelotsofprocess.TheDNAextractbySodiumacetate-ethanolprecipitationandboiledhadmoreimpurityjustlikeRNAandproteinandsoon.ConclusionKitisthebestwaytoextractDNA.KeywordsIntestinalfloraDNAExtraction人体携带有4的细菌总重量大约为27g这些细菌在人出生后就开始定植并保持数量和种类的动态平衡。正常的微生物群大部分定植于肠道它们参与宿主的生长发育促进免疫系统的成熟为宿主提供营养等等。因而微生态系统也成为宿主生理系统中不可分割的组成部分。而PCR-RFLP、T-RFLP、PCR-DGGE、ARDR等分子生物学方法可以简单、快速、高效地对微生物群落的结构与功能进行动态研究常用于复杂样品中微生物的群落构成分。而作为PCR技术的第一步模板DNA的制备至关重要2提取得到的DNA的纯度和浓度必需符合要求这是PCR技术能够成功进行的先决条件。但目前用于DNA提取的方法有很多种原理和操作步骤各不相同得到的DNA纯度和浓度也不尽一样3~4。因此我们选取了几种比较具备代表性的DNA提取方法—醋酸钠-乙醇沉淀法、水煮法、水煮法-试剂盒法、试剂盒法和CTAB法进行实验然后对得到的DNA浓度和纯度进行测定以此来评价各种DNA提取方法的优缺点。希望可以找到一种提取效果较好浓度和纯度都能符合PCR技术要求且成本较低操作较为简便比较适合我们实验室实际条件的DNA提取技术从而为PCR技术中模板DNA的制备奠定实验基础。本文将对上述几种方法分别进行分析比较。作者简介王广平974-女主管检验师研究方向微生物检验方向作者单位.广元市朝天区疾控中心广元62822.朝天区疾控中心材料和方法.材料..试剂...磷酸盐缓冲液PBS.molLpH7.2成都化学试剂厂氯化钠Nacl7.9g氯化钾Kcl.2g磷酸二氫钾KH2PO4.24g磷酸氫二钾晶体K2HPO4.392g蒸馏水加至8ml完全溶解pH值调至7.4定容至ml2℃压力蒸气灭菌2min备用。...2裂解液成都化学试剂厂氯化钠Nacl.44g乙二胺四乙酸钠EDTA·Na2.7g蒸馏水稀释至5ml用盐酸调节至pH8.于2℃压力蒸气灭菌5min备用。...3醋酸钠溶液NaAc3molLpH5.2醋酸钠晶体5.g蒸馏水稀释至2ml。...47乙醇7ml无水乙醇蒸馏水稀释至ml。...575乙醇75ml无水乙醇蒸馏水稀释至ml。...6CTAB-Nacl溶液十六烷基三甲基溴化铵-氯化钠4.gNacl溶解于8ml蒸馏水缓慢加入gCTAB加蒸馏水稀释至m于2压力蒸气灭菌5min备用。...7SDS十二烷基磺酸钠上海市计划生育科学研究所实验工厂.gSDS蒸馏水稀释至ml于2℃压力蒸气灭菌5min备用。...8Nacl溶液5molL2.93gNacl蒸馏水稀释至ml于2℃压力蒸气灭菌5min备用。...9无水乙醇已备

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